כיצד לזהות חיידק

תוֹכֶן

• בשלבים
• שיטה 1 זיהוי חיידק לפי כתם גרם
• שיטה 2 בצע את מבחן הצביעה Ziehl-Neelsen
• שיטה 3 חקר התנהגות ומראה של חיידקים
• שיטה 4 פרש את כל התוצאות

במאמר זה: זיהוי חיידק על ידי מכתים גראם בצע את בדיקת הכתמה Ziehl-Neelsen בדוק את התנהגות ומראה החיידקים פירוש כל התוצאות 43 הפניות

זיהוי חיידקים הוא משימה מורכבת. אחת הסיבות לכך היא שלפי ההערכות ישנם בעולם בין 10,000 למיליארד מינים חיידקים! זיהוי חיידקים נכון הוא חשוב מאוד, במיוחד בתחום הרפואי, בו הטיפול הראוי במחלה תלוי במידה רבה בסוג החיידק הגורם לבעיה. ברוב המקרים ההזדהות נעשית על בסיס חיסול. כדי לזהות חיידק, עליכם לבצע בדיקות מכתים, לנתח את המראה שלו ולבחון כיצד הוא מגיב היטב לתנאים שונים. אם אתה זקוק לתוצאה מהירה, קח דגימת DNA שתשלח למעבדה.

בשלבים

שיטה 1 זיהוי חיידק לפי כתם גרם

1. בררתי אם החיידק Gram חיובי או שלילי. הכתמת גרם היא שיטה לחלוקת חיידקים בין שני הסוגים הנפוצים ביותר: גרם חיובי וגראם שלילי. לראשונים יש קיר תא עבה המורכב מפולימר הנקרא פפטידוגליקן, שיש לו את הכתמים הטובים ביותר כקירות הדקים של חיידקים גראם-שליליים.
   • כמה סוגים נפוצים של חיידקים גראם-חיוביים הם סטרפטוקוקים, סטפילוקוקים, מיקרוקוקים (או מיקרוקוקים) וליסטריה.
   • להלן כמה דוגמאות נפוצות לחיידקים גראם-שליליים: Neisseria, Acinetobacter, Moraxella, Enterobacteriaceae, Vibrio, Haemophilus, Fusobacterium ו- Campylobacter.
2. נקוט אמצעי מיגון מתאימים. החיידקים והאלמנטים הכימיים בהם תשתמש במהלך הבדיקה מהווים סיכון לבריאותך. יש ללבוש משקפי בטיחות, כפפות ניטריל חד פעמיות ומעיל מעבדה בעת ביצוע בדיקת ההכתמה. לאחר שתסיימו, הכניסו את הכפפות וכל שאר החומרים המזוהמים לשקית מיוחדת. זכור לעקוב אחר נהלי המעבדה שלך כדי להיפטר מהתיק עבור מוצרים מזוהמים.
3. שים את הדגימה לצפייה בשקופית זכוכית. כדי להתחיל בבדיקה, הניחו טיפה או דגימה חיידקית על שקופית סטרילית. ואז החלק את הלהב מעל מבער בונסן שהודלק שלוש פעמים כדי לתקן את הדגימה ולמנוע את יציאתו מהצלחת כשאתם שוטפים או מוסיפים את המגיבים.
4. הוסף 5 טיפות של גביש סגול ללהב. שופכים חמש טיפות של תמיסה סגולה קריסטלית על הדגימה. המתן רגע עד שהדגימה תספוג את סגול הקריסטל.
   • החזק את הלהב במקום עם סיכות בגדים, כך שלא תכתים את הידיים.
5. שוטפים את הלהב היטב כדי להסיר את הכתם. השתמש בברז או בבקבוק סחיטה ונתן למים לרוץ לאט מאוד עד חמש שניות כדי להסיר שאריות דיו שלא דבקו במדגם.
6. שופכים חמש טיפות של כתם דיודה גראם על השקופית. זהו פיתרון המורכב מ דיודה, נתרן ביקרבונט ודודי אשלגן הגורם להמסת סגול הגביש עם דפנות התא של החיידק. יוצקים חמש טיפות מהפתרון על הדגימה ומניחים לדקה.
7. שוטפים את הדגימה עם אלכוהול או חומצה לקטית. אלכוהול ולצטון הם חומרי הלבנה ויעלו מכתים של דפנות תאים חיידקיים אם הם שליליים גרם. שופכים כמה טיפות אקונומיקה על הדגימה ונותנים לה לעבוד לא יותר משלוש שניות. לאחר מכן נסה לשטוף בעדינות במים למשך חמש שניות כדי להסיר את חומרי ההלבנה הללו.
   • אם אתה מאפשר לאקונומיקה לעבוד זמן רב, הדבר עלול לגרום להיעלמות מכתים של חיידקים גראם-חיוביים, וכתוצאה מכך שלילית כוזבת.
8. בצע בדיקת ניגודיות עם ספרנין. ספרנין הוא צבע אדום המנוגד לסגול הקריסטל ובכך מצבע את החיידקים שלא הושפעו מכתמים סגולים. שופכים כחמש טיפות של ספרנין על הדגימה ומניחים לדקה. לאחר מכן נסה לשטוף בעדינות במים למשך חמש שניות.
9. דמיינו את המדגם שלכם בהגדלה של 1000X. החיידק יהפוך לסגול או סגול אם הוא חיובי בגראם, או ורוד אם הוא גרם שלילי בגלל ספרנין.

שיטה 2 בצע את מבחן הצביעה Ziehl-Neelsen

1. השתמשו בטכניקה זו כדי לאתר חיידקים מהירים בחומצה. מינים אלה מכילים כמות גדולה יותר של ליפידים, מה שהופך אותם עמידים יותר לצבעים המשמשים בכתמי גרם. החיידקים העמידים לחומצה שייכים לסוג Mycobacterium הכולל את החיידק האחראי לשחפת (M. tuberculosis). כדי לצבוע חיידק עמיד בחומצה, עליכם להשתמש בצבע אדום הנקרא פוקסין קרבולי, העמיד לשטיפה בתמיסות חומצות או גופרתיות.
2. נקוט אמצעי מיגון מתאימים. חומרים כימיים וביולוגיים המשמשים במהלך הכתמת Ziehl-Neelsen יכולים להיות מסוכנים. בנוסף, תצטרך להשתמש במקורות חום, כמו זרבובית בונסן, מחמם חשמלי או מנורת אלכוהול. עקוב אחר ההוראות שלהלן כדי לבצע את הבדיקה.
   • לבש משקפי ראייה, כפפות ניטריל ומעיל מעבדה.
   • הקפד לא לשאוף אדים מצבעים ואקונומיקה ואל תניח לטפטפות להתיז את העיניים או העור שלך. שמור על מכולות פתוחות מתחת למכסה המנוע.
   • היזהר מאוד כשאתה מחמם את הלהב. מרבית הכימיקלים המשמשים דליקים. יתכנו גם שרידים של חומרים דליקים על השקופיות או ציוד אחר.
3. הכן את הלהב. בתנועות סיבוביות, יש לפזר באופן שווה כמות קטנה של דגימת החיידק במרכז מגלשה סטרילית. המדגם שלך אמור לתפוס כ -10 מ"מ על 20 מ"מ.
4. יבש את הלהב. הניחו את הלהב על מבנה הייבוש כאשר הדגימה פונה כלפי מעלה. תן לו להתייבש באופן טבעי למשך 30 שניות. אל תנסה לייבש את הלהב במטלית.
5. אבטח את הדגימה בחום. עם הדגימה למעלה, החלק את הלהב פעמיים או שלוש מעל צורב בונסן מואר. ניתן גם למקם את הלהב על דוד חשמלי על ידי קביעת הטמפרטורה בין 65 ° C ל- 75 מעלות צלזיוס למשך שעתיים לפחות. הקפד לא להרתיח או לשרוף את הדגימה.
6. הוסף את הפוקסין הקרבולי ללהב. שופכים כמה טיפות מהפתרון הזה על השקופית. יוצקים מספיק בכדי לכסות את הדגימה לחלוטין.
7. מחממים את הלהב כדי לתקן את הצבע. יש לחמם את השקופית בזהירות מעל צורב בונסן או מנורת אלכוהול, כאשר הדגימה מופנית כלפי מעלה, או הנח אותה על דוד חשמלי. מחממים את הלהב ל 60 מעלות צלזיוס או עד שהוא מתחיל לשחרר אדים. תן לצבוע לפעול במשך חמש דקות.
   • אם אתה משתמש בתנור חשמלי, הפעל אותו בגובה 60 מעלות צלזיוס. אם תבחר במנורת האלכוהול או במבער בונסן, עליך לצפות לראות אדים.
   • כדי לשמור על הלהב בטמפרטורה הרצויה למשך חמש דקות, יש לחמם אותו לסירוגין.
   • הקפד לא להרתיח, לשרוף או לייבש את הדגימה.
8. שוטפים את הלהב במים קרים. תן לו להתקרר חמש דקות ושטוף בעדינות מספר שניות במים צלולים. השתמש במי ברז או בבקבוק סחיטה כדי להסיר כתמי צבע שלא דבקו במדגם.
9. שופכים על הדגימה אלכוהול חומצי או חומצה גופרתית. השתמש בנפח של 3% בנפח (v / v) אלכוהול או 20% חומצה גופרתית בכיסוי מלא של הדגימה. אפשר לחומצה לעבוד עד שהצבע דוהה ומגיע לגוון ורוד בהיר מאוד. התהליך אורך בדרך כלל כעשר דקות.
10. השתמש במים נקיים כדי לשטוף את הלהב. שוטפים את הלהב בעדינות מתחת לברז או בעזרת בקבוק סחיטה. הסר היטב את כל שאריות החומצה והצביעה.
11. הוסף את חומר הניגוד. לאחר שטיפה של השקופית, שפכו על צבע של ירוק מלכיט או כחול מתילן. שני הפתרונות הללו יוצרים רקע כחלחל או ירקרק עליו יופיע הצבע האדום, כמו גם חומרים ביולוגיים אחרים, כמו תאים אנושיים וחיידקים שאינם עמידים בפני חומצות. תנו לחומרים לעבוד למשך דקה עד שתיים.
12. שטוף וייבש את הלהב. יש לשטוף היטב במים כדי להסיר את הניגודיות העודפת. לאחר שתסיים, יבש את גב הלהב במטלית יבשה ותן לו להתייבש באופן טבעי על מעמד.
13. דמיינו את המדגם שלכם בהגדלה של 1000X. החיידקים העמידים לחומצות יהפכו לאדומים או ורודים כהים. חיידקים אחרים, תאים שאינם חיידקיים ובסיס הלהב יהפכו לירוקים או כחולים.

שיטה 3 חקר התנהגות ומראה של חיידקים

1. נתח את צורת החיידקים. לאחר ביצוע בדיקת ההכתמה כדי לקבוע אם החיידק חיובי לגרם, לשלילי גרם או עמיד לחומציות, הגיע הזמן לזהות את המין בצורה מדויקת יותר. ראשית, נתח את צורת החיידקים בשקופית. שלוש הצורות הנפוצות ביותר הן קוקצי (כדורי), ספירלות ובזילי (צורת מוט).
   • ישנן כמה גרסאות של צורות אלה. חיידקים בעלי צורה עגולה (קוקוס), למשל, יכולים להופיע בזוגות (דיפלוקוקים), בשרשראות, בערמות או בקבוצות של ארבעה (טטרדות).
2. גלה אם החיידק הוא אירובי או אנאירובי. קח שתי דגימות של חיידקים וצור שתי תרבויות נפרדות. הירח חייב להיות אנאירובי (גדל ללא חמצן) ואילו השני חייב להיות אירובי (שגדל עם חמצן). אחסן את התרבות האנאירובית ב 35 מעלות צלזיוס במקום נטול חמצן לפחות 48 שעות לפני שתצפה בגידול.
   • אם חיידקים גדלים בסביבה ללא חמצן, אך לא כאשר הם נחשפים לחמצן, פירוש הדבר שהם אנאירוביים.
   • הם אמנם מתפתחים בסביבה מחומצית, אך לא בהיעדר חמצן, אך הם אירוביים.
   • כאשר הם מתפתחים בשתי הסביבות, אנו מדברים על חיידקים אנאירוביים פקולטטיביים.
3. בצע מבחן תנועתיות. חיידק הוא נייד אם הוא יכול לנוע לבד עם סמל אחד או יותר. מידת התנועתיות חשובה מאוד בזיהוי מינים חיידקיים מסוימים. ישנם מספר סוגים של תנועתיות, אך הדרך הבטוחה והקריאה ביותר היא המדיום החצי מוצק.
4. צרו תרבות למבחן תנועתיות. הכן תרבות של חיידקים במרק תרבות. עקוב אחר ההוראות שלהלן להכנת המרק לבחירתך.
5. יש לחסן את התרבות באגר סולידי למחצה לבדיקות תנועה. מעיל חלק מהתרבות המרק עם מחט חיסון סטרילית. שתלו בזהירות את המחט בצינור הימים המוצק למחצה, כגון TTC lagar, שהכנתם למבחן. על המחט לחדור ל 2/3 מכמות האגר.
   • בסיום, הסר בזהירות את המחט והקפיד שלא לחרוג מגבולות אזור החיסון.
   • דגירה של הצינור ב 30 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות.
6. קרא את תוצאת הבדיקה. האגר לבדיקת תנועתיות יהפוך לאדום במגע עם חיידקים. אם הם ניידים, הגוון האדום או הוורדרד הזה יתפשט בכל החומר. אחרת, הכתמים יוגבלו לאתר ההזרקה.

שיטה 4 פרש את כל התוצאות

1. אסוף את ההערות שלך. בכדי לדעת את סוג החיידקים, עליכם לאסוף את המידע המתקבל מהתרבויות, בדיקות הצביעה והתבוננות בצורות. אם אתה בוחן דגימות של מטופל, התסמינים שהם מביאים עשויים לעזור גם בקביעת סוג החיידק המתאים.
   • לדוגמא, אם הבדיקות מראות שהחיידקים שליליים גרם, אנאירובי, לא תנועה ואתם מבחינים בתסמינים כמו כאבי בטן, בחילה והקאות אצל המטופל, סביר להניח שהמטופל סובל מזיהום בקטריוד. fragilis.
2. התייעץ עם בסיס נתונים. ישנם אלפי מינים של חיידקים בעולם. אי אפשר לדעת הכל בעל פה. סביר להניח שתצטרך להתייעץ בספר מיקרוביולוגיה קלינית או בבסיס נתונים מקוון כדי להשוות תוצאות בדיקות עם מידע על מיני חיידקים.
   • ישנם משאבים מקוונים מצוינים לזיהוי חיידקים, אך רוב מאגרי המידע הללו זמינים באנגלית, כולל Patricbrc.org ו- GlobalRPh. עם זאת, עדיין תוכלו למצוא מידע שימושי באתר האינטרנט INRA הבינלאומי למרכז משאבים מיקרוביאליים.
3. עשו בדיקה גנטית בכדי לדעת את המינים המדויקים של החיידק. במקרים מסוימים יתכן ותצטרך לזהות את זני החיידקים. השיטה המהירה והקלה ביותר היא לבצע בדיקת DNA. בדיקות DNA מועילות גם לזיהוי חיידקים העמידים לצורות מכתים ותרביות מסורתיות. בימינו, בדיקות DNA על מיקרואורגניזמים מהירות מאוד ויכולות להיות מוכנות תוך פחות משעתיים.
   • אם אין לך גישה למעבדה שמבצעת רצף גנטי של מיקרואורגניזמים, שלח דגימת חיידק לסוכנות המתמחה.